biotechnologie c3

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Kapitoly

  1. 0:00

    Les double -brins se dérouvent, c 'est ce qui est représenté ici, pour finalement arriver à la catalyse et au clivage des deux. Donc en fait, la manière dont cette nucléase fonctionne dans une cellule, parce que ça c 'est une vitro, c 'est …

  2. 2:15

    types. Pourquoi faire la thérapie génique ? Thérapie génique au sens large, mais ce dont on va parler là, c 'est essentiellement l 'édition du génome, c 'est -à -dire aller couper un génome complexe à un endroit bien précis pour faire une m…

  3. 5:39

    Ça, c 'est connu depuis très longtemps. Donc l 'intégration du traceur au site de coupure. Après, vous extrayez à l 'ADN, vous voyez que votre ADN, il y a un des sites qui est le site que vous ciblez, et puis les autres sites qui sont des o…

  4. 7:19
    Kapitola 4: Non, non. 171s · Speaker 7

    Non, non. Ah, d 'accord. Vous venez d 'arriver là, c 'est ça ? Oui. Ok, donc si vous avez raté le cours précédent, là, effectivement, il va falloir un peu rattraper, parce que j 'ai parlé de tout ça la dernière fois, en détaille. les mécani…

  5. 10:11

    d 'accord, donc ils sont différents à gauche et à droite, c 'est pour ça que là il y a du mauve, là il y a du rose, ce ne sont pas les mêmes séquences. Et le fait que ce ne soit pas les mêmes séquences, ça permet de savoir si on séquence à …

  6. 15:14
    Kapitola 6: les signes. 118s · Speaker 1

    les signes. Donc je vous ai dit qu 'il y avait quatre moyens d 'avoir la séquence de ADN. Le bout d 'ADN peut être cloné comme ça ou cloné comme ça. Il peut être intégré comme ça ou intégré comme ça, il peut être lu comme ça ou lu comme ça.…

  7. 17:12

    3, 4, 5, c 'est pareil. L 'essentiel des coupures a eu lieu 5 nucléotides avant la panne. Pour le site 3, on voit que non, pas du tout. En fait, l 'essentiel des coupures a eu lieu 3 nucléotides avant la panne. Et il y en a un petit peu là …

  8. 19:27

    Pardon, monsieur. Oui ? J 'ai un peu du mal à comprendre la différence entre le on -target et le off -target. Ah ben, on -target, c 'est le site que vous voulez couper. Vous voulez couper ce gène -là. C 'est ce qu 'on appelle le site on -ta…

  9. 21:27
    Kapitola 9: D 'accord ? 215s · Speaker 8

    D 'accord ? Donc il peut être comme ça, lu comme ça, ou lu comme ça, ou il peut être dans l 'autre sens, lu comme ça, ou lu comme ça. Donc il y a quatre moyens, dans une machine illuminate, de lire le même double brin d 'un élément. Mais on…

  10. 25:02

    Alors maintenant, le off -target, ça va être un tout petit peu compliqué. On va y aller lentement. Donc, je vous ai dit qu 'il y avait plein de... Ça, c 'est des off -targets. C 'est des bouts d 'ADN qu 'on a séquencés et qui viennent d 'un…

  11. 26:08

    c 'est le site cible. Et vous voyez que ce site cible, il a un T à la première position de la PAM. Donc il est TGG. Quand il y a un point, ça veut dire que la séquence est identique à celle -là. Quand il y a un point, la séquence est identi…

  12. 27:16

    Cette séquence, elle est mieux expliquée par rapport à l 'autre. C 'est -à -dire ? Là, au moins, on voit mieux par rapport au premier chemin. Eh bien, tant mieux. D 'accord, donc là, vous avez pour chaque site off... off target, vous avez l…

  13. 28:27
    Kapitola 13: parents ? 68s · Speaker 2

    parents ? On peut en discuter. Quand il y a plus de différences, il y a moins de off -target. Ok, mais enfin là, quand même, vous avez quatre différences du guide. C 'est quand même super représenté. Donc là, vous en avez quatre, mais c 'es…

  14. 29:36

    lit, lit, lit, lit, va jusqu 'au bout. En fait, il ne va pas jusqu 'au bout. En fait, on sait par d 'autres expériences de biochimie que les deux ou trois derniers nucléotides du guide, souvent, ils ne servent à rien ceux -là. Donc en fait,…

  15. 30:51

    Alors, on continue. On regarde d 'autres sites. Celui -là, par exemple, le site 3. Alors là, on a seulement 11 % de on target, c 'est à dire que 9 fois sur 10 casse 9 coupes ailleurs. Alors là, qu 'est -ce qu 'il y a en observant un peu tou…

  16. 34:54

    Après, les off -target qu 'on trouve, ils ne sont pas aléatoires. Celui -là, là, on a demi... a sorti cette séquence 2475 fois donc ça c 'est un vrai off target là qui est super fréquent et c 'est qui est presque trois fois plus fréquent qu…

  17. 37:18
    Kapitola 17: OK ? Oui. 131s · Speaker 3

    OK ? Oui. Est -ce que vu qu 'ils ont contacté, qu 'il y avait beaucoup de off -targets à premier, est -ce qu 'ils se sont demandé pourquoi est -ce que Chris Coil n 'a absolument pas ? Alors ça, c 'est une excellente question. En fait, il n …

  18. 39:30

    Saumon, les deux sites HNH et RUVC, donc les deux sites catalytiques qui font la cassure. En rose, vous avez l 'ARM guide et en gris, l 'ADN double brin. Donc ici, l 'ADN double brin, il est ouvert. Vous avez ce qu 'on appelle le brin cible…

  19. 41:18

    Ici, pareil. Ici, on ne sait pas très bien qu 'il y a une interaction avec ce qu 'ils ont voulu faire dans cette période -là, parce que ça, ils vont isoler avec un clip un peu compliqué. Bref, je n 'ai pas toutes mises. Il y en a beaucoup d…

  20. 42:21

    enfin peu importe. Et dans cette région, on intègre cette construction. Donc dans la levure, c 'est très facile, je vous l 'ai dit, de nombreuses reprises, d 'intégrer un bout d 'ADN. Ça se fait très bien pour les ongologues. Donc on l 'int…

  21. 44:14

    on coupe, on fait la résection de l 'ADN, et au bout du compte, on a une GFP qui est fonctionnelle et qui va s 'exprimer. Donc, s 'il n 'y a pas eu de coupure, ou qu 'il n 'y a pas eu de réparation, les cellules, elles ne seront pas vertes.…

  22. 49:14

    et assez mal coupées par ce mutant -là. Et puis là, on voit que les nucléides, elles arrivent quand même à générer une cassure double -brun, alors qu 'elles ne devraient faire que des cassures simple -brun, etc. On a un peu tous les cas de …

  23. 51:42

    Donc, en résumé, vous ne pouvez pas avoir le beurre et l 'argent du beurre. C 'est -à -dire que vous ne pouvez pas à la fois, si vous réduisez l 'interaction avec l 'ADN, ce qui a été fait dans ces mutants, vous réduisez l 'interaction avec…

  24. 55:25

    soit on coupe moins partout, et on coupe moins bien. Voilà, et donc pour identifier tous les off -targets, les auteurs de cette étude ont utilisé la technique que je viens de vous présenter auparavant. Donc ils avaient leur cycle de levure …

  25. 57:53

    Est -ce que vous avez des questions là -dessus ? Surtout ce que je viens de raconter. Je vous parle beaucoup d 'off -target, mais parce que c 'est vraiment un problème auquel se confronter tous les gens qui font de l 'édition. Alors, si on …

  26. 58:53

    pour l 'instant, Cas9 n 'est pas un outil utilisable pour faire de la thérapie génique. C 'est trop dangereux. Alors, il y a d 'autres nucléases, dont j 'ai parlé la dernière fois, comme les thalènes, qui sont beaucoup. On a fait la même ma…

  27. 1:00:31

    Ça veut dire que lorsqu 'on parle de thérapie génique et qu 'on parle des limites, il n 'y a que CRISPR -Cas9 ? Non, alors il y a des gens qui travaillent avec les thalènes, qui sont beaucoup plus spécifiques que le système CRISPR. Mais pou…

  28. 1:02:24

    pour revenir à ça. Le seul moyen, c 'est de monter une boîte qui utiliserait les Talens et une autre technologie pour faire de la thérapie génique. Mais toutes ces boîtes, Carigou, BioScience, Editas et compagnie qui utilisent Cas9, ont eng…

  29. 1:03:32

    Arrête, c 'est bizarre. Il faudrait peut -être aller voir ce que c 'est ces mutations, et puis quand il y en a dans le génome, et puis il faudrait peut -être qu 'on ait un système pour identifier toutes les mutations qui sont faites par Cas…

  30. 1:04:51

    C 'est comme ça qu 'avance la science. Bon, euh... Donc ça c 'est la première limite technologique, la spécificité du nucléas. Deuxième limite technologique, on change complètement de registre, la vectorisation. Donc, historiquement parlant…

  31. 1:09:52

    cellules transfectées. Le problème, c 'est que comme on a tous été en contact avec des adenovirus depuis notre naissance, Le système immunitaire est instantané. C 'est -à -dire que dès qu 'on est en contact avec un adénovirus, à moins d 'êt…

  32. 1:11:41

    Alors, il y a des Cas9 plus petites qui existent. On a vu ça la dernière fois. C 'est une des raisons pour lesquelles c 'est Cas9 plus petit. Elles sont intéressantes parce qu 'on peut empacter à la fois la casse et le guide dans le même vi…

  33. 1:16:22

    Le 2, il va cibler aussi un peu le foie. Donc, c 'est un peu plus compliqué que ce que les gens racontent. Sachant qu 'en plus, il y a plein d 'AAV différents qui ont été modifiés. Alors, ce que font les chercheurs dans les labos, c 'est qu…

  34. 1:21:24

    Alors, les liposomes, c 'est quoi ? Les liposomes, ce sont des mini -cellules vides dans lesquelles on peut mettre tout ce qu 'on veut. Vous savez que les cellules des animaux, du végétaux aussi d 'ailleurs, même si la composition est diffé…

  35. 1:26:25

    Il n 'y a plus en sorte que du cholestérol. Le cholestérol, ce sont dans la membrane plasmique des animaux. Il n 'y en a pas chez les plantes, pour le coup. C 'est une différence entre les animaux et les plantes. Il y a du cholestérol. Le c…

  36. 1:28:28

    Alors, si vous travaillez sur des maladies hépatiques, c 'est vachement bien. Mais voilà. Donc, le ciblage, ça s 'appelle la biodistribution. La biodistribution des liposomes est très faible. Donc, voilà. Alors, ces liposomes, je vous ai di…

  37. 1:31:18

    Maintenant, si dans votre liposome, au lieu de mettre de l 'ADN, Donc vous avez mis de l 'ARN. C 'est un peu plus simple. Donc là, vous avez le moment de l 'ARN. Donc le début, c 'est pareil. Il faut qu 'il échappe au système immunitaire et…

  38. 1:32:37

    Ouais, mais si vous synthétisez la protéine, vous n 'avez pas besoin de la synthétiser. Elle arrive, elle est déjà nickel. Je ne dis pas que c 'est faux, hein. Juste que l 'argument où on peut synthétiser la protéine, ce n 'est pas forcémen…

  39. 1:37:37

    ce genre de polymère cationique, il y a des labos de chimie, de bio qui travaillent là -dessus, mais c 'est clairement pas utilisable en tant qu 'effecteur. Donc je vous en parle parce que ça existe, il y a des gens qui travaillent sur l 'h…

  40. 1:39:12

    Enfin, je veux dire sans CAP, la CAP protège un petit peu l 'ARN. Donc ça c 'est un messager sauvage. Alors les messagers modifiés présentent deux types de modifications. La première, c 'est une cape différente. Donc il y a deux types de ca…

  41. 1:43:28

    Alors, deux choses. La cape. Donc ça, c 'est la structure de la cape normale. Ça, c 'est la base N. C 'est cette base -là. Dans l 'exemple ici, c 'est le A. C 'est la base N. Il y a une liaison triphosphate, classique. Et ici, ça c 'est une…

  42. 1:45:07

    il y a un méthyl. Donc il y a un méthyl là et un méthyl là. Et ça, ça rend la CAP 1 plus résistante que la CAP 0. Et dans la CAP 2, non seulement il y a le premier nucléotide, mais il y a également le deuxième nucléotide qui est méthylé. Do…

  43. 1:47:31

    Vous avez un petit coup de clair. Bon, allez, on va faire une pause. On a attaqué la dernière partie du cours. Ça ne durera pas deux heures. Je le relâcherai avant. Voilà. On vient dans, dis quoi, 11 heures, disons 11h15. Ça prend en vrac. …

  44. 1:48:40

    Il y a des deux autres, il y a des checkés, si tu n 'arrives pas, si tu n 'arrives pas, si tu le demandes en public. Parce que gosse tu peux mettre plein les gosses.

  45. 1:50:26

    Oh non, je reviens, je reviens, je reviens ! C'est le délégal. C'est le délégal. Ils se sentent bien que tes filles, c'est un délisseur. C'est un peu plus de famille chinoise à govrir avec un peu mieux dessus. C'est son bien, c'est son bien…

  46. 1:52:36

    de bioéthique, parce que je vous ai des problèmes de thérapie génique. Et la thérapie génique, ça veut dire modifier le génome d 'être humain pour guérir certaines maladies. mais ça implique aussi des considérations d 'éthique. Alors il y a…

  47. 1:54:17

    Là, ça se voit très bien en microscope optique. En dessous des levures, vous avez les bactéries. Ici, j 'ai mis les chérichia coli. Là, c 'est les chagobactéries. C 'est de l 'ordre du micron. De demi à un micron, c 'est l 'ordre de grandeu…

  48. 1:59:23

    percées de canaux qui ont cette forme -là. Donc ici, les canaux, ils font 15 microns de diamètre. Donc ils ont la taille nécessaire pour laisser passer une cellule animale ou une cellule de levure. Ils sont trop grands pour une cellule bact…

  49. 2:00:31
    Kapitola 49: Monsieur ? 250s · Speaker 3

    Monsieur ? Oui ? Donc dans la troisième image, les petits fils en blanc, c 'est des canons ? Ça, c 'est des canons. Ça, ce sont les micro -canons. D 'accord ? Donc dans ces micro -canons, on peut faire passer des cellules. On peut injecter …

  50. 2:04:42

    de levures, notre saccharomyces cellulisier, 5 à 10 microns. Alors, les levures se reproduisent en bourgeonnant, donc ça donne une espèce de... C'est un bourgeon, il va grossir, grossir, grossir, et puis il va se détacher de la cellule huma…

  51. 2:08:22

    on observe ça. Il y a des cellules qui rentrent dans la puce et qui vont aller gentiment se négoiser d 'où les puces. Alors après, il y a des tas de petits artifices technologiques, les espèces de blocs à l 'entrée, c 'est de la dynamique d…

  52. 2:11:11

    au cours du temps, ça donne ça. Alors, qu 'est -ce qui se passe ? Au début, il ne se passe pas grand -chose. Les cellules commencent à se diviser un petit peu. On a remplacé le glucose par du galactose. Donc les nucléases vont pouvoir s 'ex…

  53. 2:12:35

    Alors, on va essayer d 'interpréter ça ensemble. Donc déjà, on est d 'accord, les cellules vertes, ça correspond aux cellules qui ont reçu une cassure double brun et qui ont réparé correctement cette cassure. Donc on commence par le contrôl…

  54. 2:13:42
    Kapitola 54: contrôle ? 117s · Speaker 3

    contrôle ? Ça va marcher plutôt mieux que le contrôle, parce qu 'on a essentiellement des cellules vertes, il y a peut -être quelques cellules blanches qui traînent, mais c 'est essentiellement des cellules vertes. Ça a l 'air de très très …

  55. 2:15:40

    mais en même temps, elle va aussi couper un gène de cible cellulaire, qui est important pour l 'entrée en... après la phase S, après la phase d 'orification d 'ADN, pour l 'entrée en métaux, c 'est pour la séparation des cibles. Donc en fai…

  56. 2:18:12

    Parce qu 'il y a beaucoup plus de cellules puissantes vertes et elles sont beaucoup plus nombreuses que cellules puissantes vertes. Alors... Il y a beaucoup plus de cellules vertes, c 'est -à -dire, alors ça, l 'interprétation de ça, elle e…

  57. 2:21:06

    Et puis finalement, les répétitions CTG avec CPF1. Alors, est -ce que ça marche plus ou moins bien que Cas9 ? Ça marche moins bien. Ouais. Moins bien, peut -être moins bien. Enfin, ce n 'est pas top dans tous les cas. On est d 'accord, il n…

  58. 2:25:16

    Oui, c 'est possible. C 'est considéré comme une clé permanente, normalement, d 'un point de vue médical. Il se le change tous les trois jours et il a un petit boîtier qui ressemble à un téléphone qui est juste en fonction. Bonne question, …

  59. 2:28:43

    chaque puce, chaque expérience nécessite une puce adaptée. Vous allez devoir, il faut tenir compte de ça quand on veut se lancer dans la microfluidique. Alors, donc ici c 'est un petit résumé de ce qu 'on peut faire avec ces puces. Donc vou…

  60. 2:29:52

    oui. Alors, bonne question. Les plus que je vous ai montré avec les manips de levure là. C 'est un one shot, une fois que vous avez rempli vos puits, que les cellules se sont divisées, vous jetez la puce et vous en faites une autre. Mais c …

  61. 2:31:06

    Ça, c 'est un peu plus de technologie. Ça, ça va coûter un peu plus cher, ça va être quelques euros la puce. Donc il faut être sûr qu 'à la fin, ça marche mieux que la façon de la voici. Les deux se font. Je ne sais pas s 'il y a une des de…

  62. 2:36:07

    On doit avoir des vitamines dans l 'apport quotidien, nutritionnel, pour trouver essentiellement les vitamines dans les fruits et les légumes frais. Et ces vitamines, elles sont indispensables. Et donc, est -ce qu 'on ne pourrait pas imagin…

  63. 2:39:38

    Heureusement, il y a eu peu d 'exemples de ça dans l 'histoire. Dans l 'histoire du monde, il y en a eu récemment qui envoyaient des choses assez dramatiques. Donc voilà, j 'ai pris l 'exemple de l 'euthanasie pour vous montrer un peu, pour…

  64. 2:40:57

    Non, non, non, non. Alors la peine de mort a été annulée, interdite en 1981. Premier septembre de François Mitterrand, Robert Badinter, à l 'époque garde des Sceaux, présente un projet à l 'Assemblée nationale pour abolir la peine de mort. …

  65. 2:42:07

    s 'applique aussi aux animaux ? L 'euthanasie, alors les animaux, en fait, oui, vous savez très bien que si vous avez un animal, un chat, un chien qui est en fin de vie, vous pouvez aller chez le vétérinaire qui veut lui faire une piqûre po…

  66. 2:47:07

    Et monsieur, cette mutation, est -ce qu 'elle sera sur le chromosome X ? Je ne sais pas du tout où se trouve le gène CCR5. Je ne sais pas sur quel chromosome il se trouve. Et est -ce qu 'il faut aussi la paire pour pouvoir l 'activer ? Alor…

  67. 2:49:41

    ça n 'a aucun intérêt. Vous voyez quand même que là, déjà, ça, il faut que ça marche. Et il faut que la modification se produise à un stade embryonnaire très prépare. Et il y a l 'autre limite à cette approche qu 'on va voir juste après. Ma…

  68. 2:54:22

    qui va critiquer, qui va décider ou pas de publier vos résultats, soit vous déposez ça sur une archive. Il y a des archives qui s 'appellent BioArchive, MedArchive, etc. Vous pouvez juste déposer vos résultats expérimentaux sur une archive …

  69. 2:56:20

    Donc, je sais que de savoir, si je pose ça à tous les étudiants à qui je donne ce petit cours de bioéthique, où vous vous situeriez sur cette ponte glissante ? Monsieur, déjà, j 'ai deux questions. La première, déjà, c 'est de répondre à ça…

  70. 2:59:02

    Oui, mais si, il y a des manipulations, vu qu 'il y a déjà prélève humain. Non, mais on manipule pas le génome. On ne change pas le génome. C 'est de la fécondation naturelle, assistée, mais on ne modifie pas le génome. On sélectionne les e…

  71. 3:00:20

    il n 'y a que deux points. En tout cas, on ne va pas directement vers là -bas parce que pour moi, ça induirait une sorte de... Sélection en fonction des moyens, de la personne ou pas. C 'est du transhumanisme. Oui, du transhumanisme. Et aus…

  72. 3:01:28

    juste qu 'il y a des maladies incurables et certaines qui sont quand même très néfastes pour l 'humanité en général. Par exemple, le diabète est quand même sous deux morts. Toujours de petites maladies qui sont quand même très néfastes pour…

  73. 3:02:31

    Pour moi, ce serait quand même risqué parce qu 'il y aurait beaucoup de dénuis. On part avec les maladies et puis après, on ne sait pas comment ça finit. Et surtout, comme vous avez vu dans notre exemple, sur l 'euthanasie, c 'est au début …

  74. 3:03:32

    Alors, perte de la diversité, ça ne va pas se faire rapidement, rapidement quand même. Il va falloir quelques siècles avant que la modification pénètre dans la population humaine, parce que s 'il y a un individu modifié... Même s 'il a deux…

  75. 3:04:56

    J 'aimerais savoir, est -ce que lorsque un chercheur fait ça, on n 'est pas obligé de publier ? Ah non, on n 'est pas du tout obligé de publier. Après, si on ne publie pas, on est mort, scientifiquement. Chercheur égale résultat, donc. On e…